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你知道无血清培养基的基础小知识吗

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  无血清培养基的基本配方:基本成分为基础培养基及添加组分两大部分。 用于生物制药和疫苗生产的细胞在体外培养时,多数呈贴壁生长或兼性贴壁生长;而当其在无血清、无蛋白培养基中生长时,由于缺乏血清中的各种粘附贴壁因子如纤粘连蛋白、层粘连蛋白、胶原、玻表粘连蛋白,细胞往往以悬浮形式生长。
  1、基本介绍
  无血清培养基是在合成培养基的基础上发展起来的,与传统的培养基相比,既能满足细胞在体外长时间培养的要求,又能避免动物血清所带来的不利因素。
  在使用无血清培养基时,有些细胞需要逐渐适应,即先将原来的培养基与无血清培养基混合培养,渐渐地再转为完全的无血清培养基培养。有些贴壁生长的细胞,复苏时也可用少量的血清先培养,因为血清可助细胞贴壁,然后再换成无血清培养基。
  2、主要成分
  无血清培养基由营养较完全的基础培养基和补充因子组成。
  2.1、基础培养基
  在不同细胞培养时,根据细胞需求对成分已知的基础培养基组分进行适当调整即可使细胞更好地生长并提高目的产物的表达量。大多数人工合成的培养基使用的是Ham F12/DMEM培养液(1:1等体积混合),然后补加15Mm的HEPES,1.2g/L NaHCO3。
  2.2、主要补充因子
  补充因子是代替血清的各种因子的总称。多数无血清培养液必须补加3-8种因子。胰岛素和转铁蛋白是必须补充因子,其他多数为辅助作用的因子。按其功能不同,补充因子可分为五类:
  激素和生长因子。很多细胞用无血清培养时需要加入激素,如胰岛素、生长激素、胰高糖素等。胰岛素是重要的细胞存活因子,与细胞上的胰岛素受体结合后可促进RNA、蛋白质和脂肪酸的合成,抑制细胞凋亡。此外,雌二醇、孕酮等也是无血清培养基中常添加的补充因子。
  结合蛋白。常见如转铁蛋白和牛血清白蛋白。转铁蛋白与细胞上的转铁蛋白受体结合是细胞获取铁元素的主要来源。白蛋白与脂类、激素、维生素、金属离子和生长因子结合后可调节上述物质在无血清培养基中活性的作用,此外,由于牛血清白蛋白一般添加量比较大,可增加培养基的粘度,保护细胞免受机械损伤。
  贴壁因子。许多细胞必须贴壁才能生长,这种情况下无血清培养基中一定要添加促贴壁和扩展因子,一般为细胞外基质,如纤粘连蛋白、胶原蛋白等。它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子,对许多细胞的繁殖和分化,起着重要作用。纤粘连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化,这些细胞包括成纤维细胞、肉瘤细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞、CHO细胞等。
  酶抑制剂。培养贴壁生长的细胞,需要用胰酶消化传代,在无血清培养基中不可少须含酶抑制剂,以终止酶的消化作用,达到保护细胞的目的。常用的是大豆胰酶抑制剂。
  其他补充因子。一些细胞培养使用的无血清培养基还需要补充微量元素、维生素、脂类等低分子量物质。

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