细胞在适应细胞培养基的时候要注意哪些事项

　　细胞培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。无血清培养基不加动物血清，在基础培养基中加入细胞生长有效因子，激素等。

　　有许多细胞系是相对容易适应无血清培养基和无蛋白培养基的，而对环境变化相对敏感的其它细胞则难以适应变化，这就需要更为专业的方法来让细胞适应环境变化。

　　而根据细胞系的特性，有两种方法可使细胞适应无血清培养基。第一种方法是连续适应/循序隔绝法；另一种方法是直接适应。

　　在适应过程中，细胞通常对PH和温度变化较为敏感。让细胞在每个阶段都至少有一个适应过渡期。

　　细胞存活率和细胞密度

　　细胞在对数生长期中期快速分裂，且在适应过程开始时，存活率大于90%。这一点至关重要。当细胞需传代时，建议采用1:2或1:3的小传代比例，以维持更高的细胞密度，同时提供隔绝期间可能有助于细胞的细胞生长因子。

　　当细胞适应新的培养条件时，在增大细胞传代密度。

　　细胞生长

　　如果在适应过程中，细胞停止了生长，则需让细胞有更多的时间来适应培养基组合。例如，在方法1的阶段4，向无血清培养基添加少量的血清(1-3%)。这样有助于细胞更容易地适应新的培养基。

　　然后，在几个过渡期内，缓慢地减少血清量，直至学清量为0。

　　悬浮培养物

　　一些公司的无血清培养基和无蛋白培养基不含血清中所发现的细胞贴壁因子。在一段过渡期内，贴壁细胞将开始离开表面，并成为悬浮细胞系开始生长。细胞也可能因适应而发生形态变化。监测细胞的生长速度，只要细胞能够与新系统相融合，任何形态变化都不重要。

　　细胞丛

　　在适应于无血清培养期间，细胞容易形成丛。传代培养时，将丛轻轻折断，使其分散开。将培养物从静止细胞培养瓶内转移到可旋转锥形瓶内，这样可能会有助于防止细胞丛的形成。

　　抗生素

　　由于血清蛋白易于粘合到抗生素上，因此，不建议在无血清适应过程中使用抗生素。如不存在血清蛋白，则抗生素水平可能会对细胞产生毒性。

　　预防措施

　　确保在开始适应过程前，储存有大量原培养基的细胞。如果细胞没有存活到下一阶段，则在整个过程中保存每一阶段使用的培养瓶。